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香港牡蛎新型LRR受体的克隆与功能研究; Cloning and functional study of novel LRR receptor from C.hongkongensis
刘映
学位类型硕士
导师喻子牛
2016
学位专业生物工程
关键词香港牡蛎 亮氨酸富集重复 胚胎形成 上皮间质细胞转移
摘要LRRs结构域是一种功能广泛的配体识别结合结构域,常作为核心功能域存在于多种受体胞外区。我们在香港牡蛎中发现一个胚胎时期高表达的LRR蛋白,由于其胞外域还含有一个免疫球蛋白样结构域(IG-like),因此命名为香港牡蛎LRR与IG-like结构域组合受体(LRR and IG-like domain containing Receptor in Crassostrea hongkongensis_ChLIGR)。我们采用常规克隆、HEK 293T细胞系统、原核重组蛋白制备、实时定量PCR和RNA干扰等技术,对ChLIGR开展了一系列研究,包括序列生物信息学分析,RNA维度的表达水平检测,胞外域重组蛋白体外细胞处理以及报告基因信号分析等,以查明ChLIGR在牡蛎胚胎发育时期的功能。ChLIRG胞外域含有LRRs和免疫球蛋白样结构域,是典型的I型跨膜受体蛋白。多序列比对结果显示,包括ChLIGR在内的软体动物新型LRR蛋白是LRRs和IG组合受体大家族中的独特分支。ChLIGR表达调控区含有多个与发育分化相关转录因子的识别位点和细胞迁移相关的ETS/AP-1样复合位点。胚胎发育各时期表达谱与胚胎整体原位杂交结果显示,ChLIGR在囊胚期和原肠胚期高表达,其峰值处于囊胚期。组织特异性表达谱分析结果表明,广泛表达于成体各组织,在鳃表达量最高。鳃细胞体外处理实验结果显示,神经钙黏蛋白相关基因在ChLIGR胞外域重组蛋白处理条件下表达水平显著上调,而在ChLIGR受到特异双链RNA干扰的表达抑制条件下表达水平显著下调。AP-1报告基因信号分析结果显示,外源表达ChLIGR能激活AP-1转录因子。综上所述,我们从ChLIGR受到的表达调控、转录水平的时空表达特征以及ChLIGR对神经钙黏蛋白相关基因表达的上调效应三个方面,初步证实ChLIGR参与牡蛎胚胎发育期间的上皮间质细胞转移过程。ChLIGR功能的揭示有助于进一步了解牡蛎发育相关的生理过程。
文献类型学位论文
条目标识符http://ir.scsio.ac.cn/handle/344004/14756
专题学位论文(硕士)
推荐引用方式
GB/T 7714
刘映. 香港牡蛎新型LRR受体的克隆与功能研究, Cloning and functional study of novel LRR receptor from C.hongkongensis[D],2016.
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