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曲霉N1-14’发酵产L-苹果酸代谢的基因调控研究; Studies on gene regulation of metabolismof L-malic acid fermentation production by Aspergillus SP.N1-14’
乐贤松
学位类型硕士
导师吴清平
2016
学位专业生物工程
关键词基因克隆分析 过表达 基因工程 产lma水平
摘要L-苹果酸(L-malic acid,LMA)是生物体代谢过程中产生的一种重要中间代谢物,参与众多重要的物质和能量代谢。随着对L-苹果酸的需求日益增加、L-苹果酸合成和代谢途径的阐明、分子生物信息学的发展以及基因调控技术的成熟,使得对生产菌株根据代谢通路进行分子水平上定向改造以提升L-苹果酸产量成为可能。 本研究为了解曲霉(Aspergillus sp.)N1-14’的高产LMA机制,设计同源引物扩增丙酮酸羧化酶基因(pyc)和苹果酸脱氢酶基因(mdh)。通过TA克隆、测序并推导出两种酶的氨基酸序列,Blast比对和3D模拟分析其突变位点与酶活的关系,为后续研究曲霉N-14’的高产LMA机理和酶的特异性奠定基础。基于还原性TCA循环(reductive TCA cycle, rTCA)是曲霉属产LMA的主要途径,理论上高表达rTCA循环中的丙酮酸羧化酶(PYC)和苹果酸脱氢酶(MDH)能提升LMA的产量。本研究为探索提升曲霉N1-14’产LMA水平的新途径,通过基因工程手段,过表达PYC、MDH以及异源表达粟酒裂殖酵母的苹果酸转运蛋白(SpMAE1),一方面增加丙酮酸向LMA的转化量,另一方面优化LMA向细胞外转运从而降低胞内积累的LMA引起的反馈抑制。
文献类型学位论文
条目标识符http://ir.scsio.ac.cn/handle/344004/14757
专题学位论文(硕士)
推荐引用方式
GB/T 7714
乐贤松. 曲霉N1-14’发酵产L-苹果酸代谢的基因调控研究, Studies on gene regulation of metabolismof L-malic acid fermentation production by Aspergillus SP.N1-14’[D],2016.
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