Marinacarbolines甲基化基因mcbD的筛选及其功能
陈奇; 秦湘静; 李青连; 鞠建华
2017
发表期刊微生物学报
卷号57期号:07页码:1095-1105
摘要【目的】定位Marinactinospora thermotolerans SCSIO 00652基因组中负责marinacarbolines甲基化修饰的基因mcbD并鉴定其功能。【方法】游离M.thermotolerans SCSIO 00652的基因组序列中功能注释为甲基转移酶的蛋白,使用MEGA 6自带的ClustalW与来自于marformycins生物合成途径中的Mfn G(D/L-酪氨酸甲基化酶)进行多序列比对,用邻接法(Neighbor-Joining)构建系统进化树,筛选到与MfnG进化关系最近的Orf03255(Mcb D);扩增mcbD后克隆至pET28a(+)并在E.coli BL21(DE3)中表达,结合Ni-NTA亲和层析法纯化获取较高纯度的McbD活性蛋白;以marinacarboline B为底物,利用高效液相色谱检测McbD的体外酶活;利用基于PCR-targeting的遗传操作体系构建mcb D插入失活突变株((35)mcbD)并分析其与野生型菌株的发酵产物差异。【结果】N-末端融合组氨酸标签的McbD蛋白在E.coli BL21(DE3)中可溶性表达,亲和层析纯化的McbD能够以marinacarboline B为底物催化形成marinacarboline C;mcbD基因阻断突变株ΔmcbD与野生型相比不产生化合物marinacarboline C,同时累积marinacarboline B。【结论】McbD为marinacarbolines生物合成中必需的O-甲基转移酶。
部门归属安徽医科大学生命科学学院;中国科学院南海海洋研究所中国科学院热带海洋生物资源与生态重点实验室广东省海洋药物重点实验室中国科学院海洋微生物研究中心;中国科学院大学;
关键词Marinacarboline 甲基化 生物合成 酶反应
资助项目安徽医科大学博士科研资助基金(XJ201512);; 国家自然科学基金(41406195)~~
文献类型期刊论文
条目标识符http://ir.scsio.ac.cn/handle/344004/17353
专题中科院海洋生物资源可持续利用重点实验室
通讯作者陈奇
推荐引用方式
GB/T 7714
陈奇,秦湘静,李青连,等. Marinacarbolines甲基化基因mcbD的筛选及其功能[J]. 微生物学报,2017,57(07):1095-1105.
APA 陈奇,秦湘静,李青连,&鞠建华.(2017).Marinacarbolines甲基化基因mcbD的筛选及其功能.微生物学报,57(07),1095-1105.
MLA 陈奇,et al."Marinacarbolines甲基化基因mcbD的筛选及其功能".微生物学报 57.07(2017):1095-1105.
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