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溶藻弧菌噬菌体VP670生物学特征及其內溶素cwl Q、穿孔素holA基因功能研究
刘秋婷
Subtype硕士
Thesis Advisor罗鹏
2017-05-22
Degree Discipline海洋生物学
Keyword溶藻弧菌 噬菌体 內溶素 穿孔素 Dna提取
Abstract溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是一种常见的海洋致病菌。噬菌体(Bacteriophage)是一种能够侵染细菌并在宿主细菌体内进行增殖的病毒,作为细菌的天然杀手,噬菌体在自然界中广泛分布,在细菌性感染尤其是多重耐药菌感染的治疗方面具有抗生素无法比拟的优势。利用噬菌体进行人类和水产动物弧菌病防治已经有一些报道,并且分离出一些噬菌体,但是很少见溶藻弧菌噬菌体的分离、全基因序列和噬菌体基因功能研究的报道。本文从湛江沿岸海水中分离出一株溶藻弧菌致病株E06333的噬菌体VP670,经鉴定属于短尾噬菌体科自复制短尾噬菌体亚科的种类。依托Illumina Miseq测序平台对噬菌体VP670进行测序并完成全基因组测序,序列分析表明:噬菌体VP670基因组DNA包含49个开放式阅读框,43121个核苷酸,GC含量为43.4%。整个噬菌体VP670基因组包含复制与调节模块,组装模块,裂解模块和结构模块这四个模块,。 噬菌体VP670包含一个穿孔素基因(holA)和一个内溶素基因(cwlQ),基因功能预测其组成一个二元系统对宿主菌进行裂解。cwlQ 产物CwlQ无信号肽序列也无跨膜结构域序列。 将holA与cwlQ二基因融合片段及单独的cwlQ插入到pBAD18kan表达载体上,构成的重组质粒pBAD18kan-holA-cwlQ及pBAD18kan-cwlQ。pBAD18kan-holA-cwlQ在大肠杆菌DH5α中诱导表达时,产生显著的溶菌作用,然而pBAD18kan-cwlQ诱导表达时,并不能产生溶菌作用。结果表明,CwlQ确实具有强烈的溶菌作用,但当在细菌体内表达时,必须经由HolA形成的孔洞到达肽聚糖层的作用位点,才能起到溶菌作用。holA 及cwlQ功能研究,为进一步利用噬菌体VP670生物防治溶藻弧菌病及cwlQ工程化应用打下了基础。 由于缺乏噬菌体基因组提取的方法,本研究过程中,也探索发明了一种通用的噬菌体基因组提取的方法并开发成试剂盒,结果表明,通过此试剂盒提取的噬菌体基因组DNA不仅纯度高,可以满足下游实验需求且无宿主菌DNA污染。
Document Type学位论文
Identifierhttp://ir.scsio.ac.cn/handle/344004/17424
Collection学位论文(硕士)
Recommended Citation
GB/T 7714
刘秋婷. 溶藻弧菌噬菌体VP670生物学特征及其內溶素cwl Q、穿孔素holA基因功能研究[D],2017.
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