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凡纳滨对虾Na+/HCO3-共转运体基因的克隆及其pH调节功能的研究
蔡奕明
学位类型硕士
导师胡超群
2017-07-02
学位专业生物工程
关键词na+/hco3- 共转运体 Litopenaeus Vannamei 原位杂交 Ph刺激 Rna干扰 酸碱平衡
摘要凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei),俗称南美白对虾,是我国最主要的养殖对虾。经实验证明,凡纳滨对虾对高pH环境有较强的耐受力,经过逐步驯化后能在pH 9.0以上的水体生存,具有在盐碱地养殖的潜能。凡纳滨对虾能够在较广的pH环境中成活,这与其强大的pH调节能力有着密切的关系。因此,深入研究凡纳滨对虾与pH调节相关的基因,对阐明其pH调节的分子机制和选育耐高pH品种具有重要意义。Na+/HCO3- 共转运体(NBC)是pH调节过程中的一个关键的跨膜离子转运蛋白,本文围绕凡纳滨对虾Na+/HCO3- 共转运体基因(Lv-NBC)进行了以下研究 1. 通过RACE方法,首次从凡纳滨对虾中克隆到Lv-NBC的全长cDNA序列。获得的Lv-NBC cDNA序列全长为4479 bp,其中包含59 bp的5'-非翻译区(UTR),835 bp的3'-UTR和3585 bp的开放阅读框(ORF),其编码1194 个氨基酸的蛋白质,推导的分子量为134.34kDa,预测的等电点为6.15。Lv-NBC的结构域是由两个功能结构域(Pfam:Band_3_cyto和HCO3_cotransp)和十二个跨膜(TM)结构域组成。 2. 阐述了Lv-NBC在组织中的分布情况。实时荧光定量PCR结果表明,Lv-NBC在不同组织中均有表达,其中鳃的表达量最高,其次为胃、脑、肌肉、肠和心脏,而眼柄、肝胰腺和血细胞中表达量则较低。原位杂交结果显示,Lv-NBC在虾的鳃中广泛表达,并且主要在次级鳃丝的细胞中表达。 3. 研究了凡纳滨对虾鳃Lv-NBC mRNA在低pH(6.8)和高pH(8.9)刺激下的表达模式。在刺激后1小时,pH 6.8和8.9组中Lv-NBC mRNA的相对表达水平都急剧增加至峰值(p< 0.05),然后随时间流逝逐渐下降。在刺激后12小时,所有刺激组中Lv-NBC mRNA的表达水平均降至本底水平。结果表明:Lv-NBC可能参与凡纳滨对虾体内的pH调节。 4. 利用RNA干扰(RNAi)实验,研究了在pH胁迫下Lv-NBC的沉默对凡纳滨对虾存活率的影响。结果表明,注射siRNA-1的对虾在pH胁迫后短时间内出现大量死亡(高低pH胁迫后6小时存活率均低于40%),与此同时,“DEPC水”和“NC siRNA”注射组中虾的存活率较高。结果表明:Lv-NBC在对虾适应低和高pH环境时起着重要作用。 以上研究结果表明,Lv-NBC是凡纳滨对虾体内pH调节过程中一个重要的基因,对其体内pH稳态的维持具有重要作用。
文献类型学位论文
条目标识符http://ir.scsio.ac.cn/handle/344004/17432
专题学位论文(硕士)
推荐引用方式
GB/T 7714
蔡奕明. 凡纳滨对虾Na+/HCO3-共转运体基因的克隆及其pH调节功能的研究[D],2017.
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