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干牡蛎酶解制备抗氧化功能肽的研究
李茹
学位类型硕士
导师尹浩
2017-07-02
学位专业生物工程
关键词干牡蛎 蛋白酶解 分离纯化 活性肽 抗氧化
摘要牡蛎是我国的重要养殖贝类,近年来,牡蛎蛋白及其酶解物的抗氧化性已经成为研究热点,已有文献报道经蛋白酶酶解后获得的小分子肽类具有多种生物活性,如抗氧化活性、抗肿瘤活性以及血管紧张素抑转化酶(ACE)制剂活性等,在生物医药、保健品以及化妆品等领域具有广阔的开发利用前景。同时,《中国药典》中记载将干牡蛎作药,具有重镇安神、软坚散结等功效,而目前尚未见有关干牡蛎酶解产物的研究报道。鉴于原料状态是影响酶解产物的重要因素,本文对干牡蛎的酶解方法及其抗氧化酶解物开展研究,以期发现活性良好的新型肽类,为深入开发牡蛎资源提供理论依据和技术支持,为抗肿瘤、抗氧化等药物的研发提供研究基础。主要研究结果如下: 1. 对干牡蛎的主要成分进行分析,测得干牡蛎中的蛋白质含量为49.7%,脂肪含量为6.5%;利用氨基酸分析仪对干牡蛎中的16种氨基酸含量测定,分析表明干牡蛎中的氨基酸含量丰富,种类齐全,其中与风味有关的氨基酸如甘氨酸、谷氨酸以及精氨酸含量较高,表明干牡蛎是一种美味营养的食材,可以用来制备抗氧化活性肽的优质原料。 2. 对酶解干牡蛎的蛋白酶进行筛选,分别采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶以及胰蛋白酶水解干牡蛎,综合比较了各个酶解产物的分子量,水解度以及DPPH·清除能力,结果显示碱性蛋白酶效果最佳。3. 对碱性蛋白酶酶解干牡蛎的条件进行优化,首先采用单因素实验分别考察了温度、pH、料液比、酶底比以及反应时间对碱性蛋白酶酶解反应的影响,进而利用响应面法对其酶解条件进行优化,发现温度对碱性蛋白酶水解反应的影响要大于pH和酶底比,得到其二次回归方程为:Y=81.83+3.95* A+1.32* B+2.54* C+0.56 * A * B-1.36 * A * C+2.56 * B * C-7.24 * A^2-2.46* B^2-7.63* C^2,最佳酶解条件:温度为55℃,pH为10,酶底比(E/S)为4400U/g,此条件下获得的最大DPPH·清除率为(76.73±5.99)%。 4. 利用不同的抗氧化性能的测定手段(ABTS法、DPPH·清除法以及羟自由基清除法)对干牡蛎酶解物的活性进一步测定,结果证实其酶解物具有良好的活性。 5. 对干牡蛎酶解物中16种氨基酸进行测定,发现干牡蛎经酶解后,其中的苏氨酸、丝氨酸、脯氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸和组氨酸含量均升高。 6. 凝胶电泳法和空间排阻色谱分析表明酶解产物的分子量主要分布在1KDa-14KDa,对抗氧化牡蛎酶解物的有效成分开展进一步研究,通过反复地超滤、凝胶柱色谱以及反相高效液相色谱分离纯化,获得4个新型抗氧化肽类,分子量分别为: 863.4Da、1102.6Da、1136.6Da、和857.4Da,经过质谱数据分析,鉴定其结构为:TPEAMTSK、VAPEEHPVLL、VPSQANGATHR和DANPLSGGK。
文献类型学位论文
条目标识符http://ir.scsio.ac.cn/handle/344004/17446
专题学位论文(硕士)
推荐引用方式
GB/T 7714
李茹. 干牡蛎酶解制备抗氧化功能肽的研究[D],2017.
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